Używasz Trusted_Connection=True a zatem użytkownika ApplicationPoolIdentity lub IIS APPPOOL\mysite jest dostarczany do serwera SQL.
Opcja 1. Przyznaj uprawnienia do IIS APPPOOL\mysite na serwerze SQL.
Opcja 2. Użyj User Id=User_Id;Password=****** zamiast Trusted_Connection=True